생화학8 Western blot을 위한 항원/항체의 이해와 방법 Western blot을 진행하기 위해서는 전기영동을 통한 단백질의 분리가 이루어져야 한다. 이전 포스팅에서 다루었던 SDS-PAGE를 진행한 후, 웨스턴 블랏을 진행하는 방법과 검출 원리에 대해 이해해보려 한다. Western blot 생화학 연구의 일반적인 요구사항 중 하나는 다양한 단백질을 포함하는 혼합 샘플에서 표적 단백질을 구체적/특이적으로 검출하는 것이다. 이를 위해 항원과 항체 결합의 특이성을 이용하여 단백질을 검출하는 기법이 사용되고 있다. 항원-항체의 결합은 꼭 맞는 열쇠와 열쇠구멍 같은 매우 특이적인 결합이다. 웨스턴 블랏은 고체 지지체에 고정되어 있는 단백질들 중에서 항체가 항원으로 인식하는 단백질에만 결합되는 특이성을 통해 단백질을 검출하며, 항원-항체 결합을 사용하기 때문에 Imm.. 2023. 3. 8. 전기영동 - PAGE와 SDS-PAGE 위의 사진은 단백질 시료를 SDS-PAGE 후, 염색 시료로 단백질을 염색하여 얻은 결과이다. 전기영동 과정을 거쳐 단백질들이 크기에 따라 분리되어 각각의 선을 보인다. 이러한 결과를 보이는 원리를 이해해 보자. 전기영동(Electrophoresis) 전기영동은 이전 글에서 한 번 간단하게 다룬 적이 있지만, 해당 글은 유전자를 다루는 것에 초점이 맞추어져 있었기 때문에 단백질의 분리에 대해서는 알아보지 않았다. 유전자 분석을 위한 전기영동과 단백질의 전기영동이 진행하는 방식에는 약간의 차이가 있을 수 있지만, 기본적인 원리는 동일하다. 전기영동은 전하를 가지는 물질이 전기장 내에서 반대의 전하 방향으로 향하는 것을 이용하여 물질을 분리, 분석한다. 물질의 이동은 전기장에 흐르는 전류의 세기와 분리되는 .. 2023. 3. 7. 단백질 정량법 - 자외부 흡수법, Bradford 및 그 외 방법 여러 가지 목적 단백질을 발현, 분리하여 준비된 시료에 얼마만큼의 단백질이 존재하는지 확인하기 위해서는 단백질의 정량이 필수적이다. 적절한 단백질 정량법을 선택하고, 각 방법의 원리를 이해하기 위해 다양한 정량법을 살펴보자. 단백질 정량을 위한 자외부 흡수법 자외부 흡수법은(UV spectrometri method)는 특별한 시약이나 반응 시간, 표준곡선이 불필요한 간단한 정량 방법이다. 이름에서 알 수 있듯이 UV를 이용하는 방법으로, 단백질의 두 가지 특성을 이용한다. 첫 째, 단백질을 구성하는 아미노산 중 페닐알라닌, 트립토판, 티로신과 같이 방향족 아미노산이 280nm에서 흡광도를 갖는다. 둘째, 단백질에서 아미노산들을 연결하는 '펩타이드 결합(peptide bond)'이 200nm에서 흡광도를 .. 2023. 3. 6. 친화 크로마토그래피란? His-tag 및 기타 태그 앞선 3개 글에서 크로마토그래피가 무엇인지와 몇 가지 크로마토그래피의 종류에 대해 다루었다. 여러 물질이 혼합된 시료에서 목적 물질만을 분리해 내는 것은 상당히 중요하다. 특이적 결합으로 높은 분리능을 갖는 방법 중 하나인 친화 크로마토그래피를 알아보자. 친화 크로마토그래피란? 이온 교환이나 젤 거름 크로마토그래피 등 여러 가지 크로마토 그래피 방법들은 알짜 전하의 크기나 질량 등의 특성을 이용하여 시료 물질을 분리할 수 있으나, 명확하게 원하는 목적 단백질만을 분리할 수는 없다. 친화 크로마토그래피 (Affiinity chromatography)의 가장 큰 특징은 원하는 목적 단백질에만 작용하는 특이적인 결합을 사용하여 분리한다는 것이다. 이러한 결합에 항원-항체의 결합, 효소-기질의 결합, 수용체-리.. 2023. 3. 5. 이전 1 2 다음
